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离子交换层析检测仪使用常见问题

点击次数:69发布时间:2023-01-13
  离子交换层析检测仪是利用样品中带电分子与色谱基质固定相中带相反电荷的部分之间的相互作用。这种类型的分离很难使用其他技术,因为电荷很容易被所用缓冲液的pH值控制。两种类型的离子交换分离总体来说是阳离子交换和阴离子交换。在交换过程中若是阴离子互换为固定相带+电荷,相反在阳离子互换过程中,固定相带负电荷。
  
  离子交换层析是利用生物样品中多种组分因自身不同的电负性而与离子交换剂产生不同的结合力,并通过改变洗脱液的离子强度,改变各组分与离子交换剂的结合力,而达到分离纯化的目的。一般常用梯度洗脱法,即在洗脱的过程中逐步、连续增大洗脱液的离子强度,依次将各组分洗脱下来。
  
  离子交换层析检测仪与梯度混合器配合,可以产生离子强度呈线性梯度变化的洗脱液;在线检测生物样品随洗脱液中离子强度改变的洗脱峰。通过改变线性梯度的斜率和其他一些条件,克服洗脱峰峰形过宽、拖尾和重叠现象,得到分辨率较好的分离效果。
  
  1、离子交换层析分为哪几种?
  离子交换层析可以根据配基的不同可以分为阳离子交换层析和阴离子交换层析。阳离子交换柱可以吸附带正电荷的蛋白,阴离子交换柱可以吸附带负电荷的蛋白。
  
  2、选阳离子还是阴离子?
  蛋白是两性分子,具有等电点PI。当缓冲液的PH值低于蛋白等电点PI,蛋白带正电,选阳离子交换柱;当缓冲液的PH值高于蛋白等电点PI,蛋白带负电,选阴离子交换柱。
  
  3、强和弱的区别?
  强离子交换剂载量在很宽的PH范围内保持恒定,弱离子交换剂载量会随着PH而变化。强离子交换剂,当选择性不够好时,尝试弱离子交换剂。
  
  4、如何选择缓冲液PH值?
  建议选择PH6-8的中性缓冲液。可以使用和等电点相差1个PH的缓冲液作为初始尝试,如果要达到最好分离效果,一般需要摸索PH条件。
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