在微生物检测领域，霉菌计数是评估食品、药品、环境样本卫生质量的关键指标，而
霉菌计数板作为标准化计数工具，其操作规范性直接决定结果准确性。掌握科学的操作技巧与核心要点，能有效减少误差，提升检测数据的可信度。
一、计数板选择与前期准备：奠定精准基础
选择适配的计数板是首要环节。需根据样本中霉菌浓度选择对应规格的计数板，常见的1mm×1mm×0.1mm规格计数室（容积0.1μL）适用于中低浓度样本，高浓度样本则需搭配稀释型计数板或提前进行梯度稀释。同时，要检查计数板的计数室是否完好，避免因划痕、污渍影响观察，使用前需用无水乙醇擦拭计数板与盖玻片，随后置于酒精灯外焰上方轻微烘烤灭菌，冷却至室温后备用，防止温度差异导致样本液蒸发或冷凝。
二、样本处理：控制误差的关键步骤
样本稀释的均匀性直接影响计数结果。液体样本需采用漩涡振荡器振荡1-2分钟，固体样本则需按标准比例加入无菌生理盐水，经均质器处理成均匀悬液。稀释过程中，需严格遵循无菌操作，避免交叉污染，且稀释倍数需合理选择——通常以每个计数室中霉菌孢子或菌丝体数量在30-300个为宜，若数量过多易导致重叠计数，过少则会增加统计误差。此外，对于含菌丝体的样本，需避免剧烈搅拌破坏菌丝结构，可适当加入少量吐温-80改善分散性。
三、计数操作：规范流程保障准确性
加样时需用微量移液器吸取10μL稀释后的样本液，缓慢滴加在计数板计数室边缘，利用毛细作用使液体自然充满计数室，避免产生气泡——若出现气泡，需重新加样，因气泡会遮挡视野，导致计数遗漏。盖玻片的放置也需注意，应采用“倾斜式”覆盖，先将盖玻片一端接触样本液，再缓慢放下，防止液体溢出或产生气泡。
计数过程中，需遵循“计上不计下、计左不计右”的原则，避免重复计数或遗漏。对于压线的霉菌孢子或菌丝体，仅计数相邻两边及夹角处的个体。同时，要区分霉菌与其他微生物（如细菌、酵母菌），可借助霉菌的菌丝结构、孢子形态等特征进行辨别，必要时可通过染色（如乳酸酚棉蓝染色）辅助观察。建议对同一样本进行3次平行计数，取平均值作为最终结果，若3次计数结果偏差超过10%，需重新检测。
四、结果分析与清洁维护：延伸操作价值
计数完成后，需根据稀释倍数计算样本中霉菌的实际浓度（公式：霉菌浓度=计数室中霉菌数量×稀释倍数÷计数室容积），并结合相关标准判断样本是否合格。此外，计数板的清洁维护至关重要，使用后需立即用蒸馏水冲洗计数室，再用无水乙醇擦拭干净，置于干燥盒中保存，避免长期暴露在潮湿环境中导致发霉或腐蚀，影响后续使用精度。
